愈伤组织的成功诱导与品种的基因型有关?摇Lloyd等(1988)曾研究Roseprsica与xanthina,hybrida,Clarissa,Rcabrosa的愈伤发生能力,发现只有Rosepersica与xanthina在MS基本培养基上,添加低浓度的BAP和NAA时,节间能产生愈伤,愈伤组织脆弱,呈淡黄绿色。Kunitake等(1993)研究了RoserugosaThunb,Rosemultiflora,Roseallbacv,SemiplenaRosehybridacv,DuplesRoseharisonii,Rosespinosissi的未成熟种子的愈伤发生能力,发现只有RoserugosaThurb能产生愈伤组织,品种Rontl和Soraya比品种Baccara和Mercedes更易产生愈伤(Kintzios等,1999)。
外植体类型?摇Aren等(1993)详细地调查了RosehybridacvMeirutral不同外植体的愈伤诱导率,发现不同外植体愈伤产生的能力不同,叶为90%,根为70%,节间为55%,花药为19%。
激素激素也是影响愈伤生成的重要因素,Rout等(1991)以Landora为材料,在添加BA和NAA,2,4-D的MS的培养基上,外植体在接种的7~12d后,在近轴面的叶柄和中脉处产生愈伤,愈伤组织诱导频率高达92%。在接种后15~20d,外植体茎切端处产生愈伤,诱导率为76%。生长素种类和浓度对愈伤产生能力的影响同样很大。早期实验多采用NAA结合BAP或BA等,近年来多采用2,4—D,并证明2,4—D是诱导愈伤的必要因素(Kintzios等,1999;Rout等,1996;vanderSalm等,1996;Vises—suwan等,1997)。进一步研究发现2,4-D对愈伤的诱导效果依赖于月季的基因型,如2,4—D浓度从113umol/L增加到181umol/L降低了Rosehybrida栽培种“Care-freeBeauty”的愈伤诱导频率,但该浓度则对另一个品种“GrandGala”无影响。对于“RedSunblaze”而言,当浓度从113umol/L增加到452umol/L,则表现出愈伤的诱导率提高了,随后当2,4—D再增加,则显著地降低愈伤的诱导频率。愈伤组织在诱导愈伤组织的培养基上能得到很好继代培养(subculture、Li等,2002)。VanderSalm等(1996)证明2,4—D对诱导Rosepersica与xanthina和Moneyway产生愈伤是非常必要的,进一步添加低浓度的BA有正效应,但如BA浓度过高,则产生抑制作用。与以上实验结果不同,Kintzios等(1999)则发现2,4—D对愈伤诱导有负影响作用,可能因为采用的外植体是成熟的叶片。
合子胚的发育时期对愈伤的形成能力也有影响?摇如处于心形胚的合子胚,其愈伤诱导率只有2%,子叶胚时的合子胚愈伤诱导率达到85%。
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